100 אסטקסנטין טהורנמצא באורגניזמים ימיים כמו מיקרו -אצות (Haematococcus pluvialis), סלמון, פורל, קריל ושרימפס. הזינוק בפופולריותו בתעשיות התזונה, הקוסמטיקה, החקלאות והמשקאות המזון והמשקאות מונע על ידי מחקר נרחב המדגיש את היתרונות שלו, העולים על אלה של נוגדי חמצון רבים אחרים כמו ויטמין E ו- {}}} קרוטן. יתרונות אלה כוללים מאבק במתח חמצוני, הפחתת דלקת, שיפור בריאות העור, הגברת הסיבולת ותמיכה בבריאות העיניים. עם זאת, היעילות, הבטיחות ושווי השוק של מוצרי אסטקסנטין בתפזורת קשורים באופן מהותי לאיכותם, לטוהר ולריכוזם. אבל איך לבדוק אסטקסנטין?

bulk astaxanthin

החשיבות של בדיקת אסטקסנטין

שוק האסטקסנטין העולמי מתרחב במהירות, צפוי להגיע למיליארדי דולרים בשנים הקרובות. צמיחה זו מלווה במגוון מגוון של 100 מוצרי אסטקסנטין טהורים: סינטטי לעומת טבעי, שמן - מתלים מבוססים, תמציות אבקה, רך וקרמים אקטואליים. גיוון זה מציג אתגרים משמעותיים:

• אימות עוצמה:

האם המוצר מספק את המינון המפורסם של אסטקסנטין?

• הערכת טוהר:

האם האסטקסנטין הטבעי נקי מממסים מזיקים, מתכות כבדות, חומרי הדברה ומזהמים מיקרוביאליים?

• זיהוי סטריאואיזומר:

אסטקסנטין טבעי מ- Haematococcus pluvialis נמצא כמעט אך ורק בצורת ה- 3S הזמינה יותר, 3 של 3. אסטקסנטין סינטטי, המיוצר מפטרוכימיקלים, הוא תערובת של שלושה סטריאו -אסומרים (3s, 3, 3R, 3 ו- 3R, 3'R) ובדרך כלל נחשבת לפעילות ביולוגית נמוכה יותר. הבחנה ביניהם היא קריטית.

• ניטור יציבות:

100 אסטקסנטין טהור רגיש מאוד להשפלה מחמצן, אור וחום. הבדיקה מבטיחה שהמוצר יישאר חזק לאורך חיי המדף שלו.

• אותנטיות וניאוף:

ניתן להשתמש ב - עלות אסטקסנטין סינטטי או פיגמנטים אחרים כדי לשמש למוצרים טבעיים יקרים יותר. בדיקות מתוחכמות נדרשות כדי לאתר הונאה זו.

לפיכך, פרוטוקול בדיקת פנים רב - פרוטוקול בדיקת פנים הוא חיוני עבור 100 יצרני אסטקסנטין טהורים, ספקים וסוף - כדי להבטיח שהם עובדים עם מוצר אמיתי, חזק ובטוח. ספקים כמו גואנג'י ביוטק, כיצרנית אסטקסנטין בתפזורת מיוחדת, מיישמים פרוטוקולי בדיקה אלה בכל שלב, החל מביומסה גולמית ועד תמצית מוגמרת, כדי להבטיח שלמות המוצר.

איךמִבְחָן אסטקסנטין?

ספקטרופוטומטריה

• עקרון:

זוהי שיטה יעילה קלאסית, מהירה ועלות -} המבוססת על ספיגת האור באורכי גל ספציפיים . 100 אסטקסנטין טהור יש מקסימום ספיגה אופיינית בממסים שונים (למשל, ~ 470-480 ננומטר באצטון, כלורופום או אתנול).

Spectrophotometry test

• שיטה:

דגימת 100 האסטקסנטין הטהורה מומסת בממיס מתאים והספיגה נמדדת באמצעות UV - VIS Spectrophotometer. הריכוז מחושב באמצעות החוק לבירה - Lambert (A=εCL), תוך הסתמכות על מקדם הכחדה טוחנת מראש לאסטקסנטין (למשל, א_1%^{1 ס"מ}≈ 2100 באתנול ב ~ 480 ננומטר).

• יישום:

המתאים ביותר לאומדנים מהירים ומחוספסים של תכולת הקרוטנואידים הכוללת בביומסה גולמית, משחת אצות או שמנים מרוכזים. הוא נמצא בשימוש נרחב בבית - לניטור תהליכים.

• מגבלות:

זה חסר ספציפיות. הוא מודד כרומופורים מוחלטים (תרכובות צבעוניות) ואינו יכול להבחין בין אסטקסנטין, האסטרים שלו, קרוטנואידים אחרים (כמו קנטקסנטין או - קרוטן), או מוצרי השפלה. זה לא מקובל על הסמכת מוצר סופית בה נדרש כימות מדויקת.

גבוה - כרומטוגרפיה נוזלית של ביצועים (HPLC)

HPLC היא השיטה החד -משמעית לבחירה לזיהוי, הפרדה וכימות מדויקים של 100 אסטקסנטין טהור וצורותיו השונות.

• עקרון:

HPLC מפריד בין התערובת המורכבת של תרכובות במדגם המבוסס על חלוקת הדיפרנציאל שלהם בין שלב נייח (עמודה) לשלב נייד (ממס). לאחר מכן מתגלים ומכמתים את התרכובות המופרדות, בדרך כלל באמצעות גלאי מערך פוטודיוד (PDA).

HPLC test

• תצורות HPLC מפתח לאסטקסנטין:

הפוך - שלב HPLC (RP - HPLC): זהו ההתקנה הנפוצה ביותר. נעשה שימוש בשלב נייח קוטבי ללא - קוטב (למשל, C18) ושלב נייד קוטבי (למשל, מתנול, אצטוניטריל, מים, לעתים קרובות עם שינויים כמו אתיל אצטט או דיכלורומטאן). זה מפריד בצורה מצוינת על אסטקסנטין לבין האסטרים שלו (Monoesters elute לפני דיסטרים) ומקרוטנואידים אחרים.

• Chiral HPLC:

טכניקה מיוחדת זו משתמשת בשלב נייח כיראלי שנועד להפריד בין אננטיומרים. זוהי השיטה המוחלטת להבחנה טבעית (3S, 3's) 100 אסטקסנטין טהור מהתערובת הסינתטית (3S, 3's, 3R, 3's, 3R, 3'R). זהו מבחן קריטי לאותנטיות.

• איתור:

גלאי ה- PDA חיוני מכיוון שהוא מספק את הספקטרום Vis של UV - של כל שיא שנמצא מהעמודה. טביעת אצבע ספקטרלית זו מאפשרת זיהוי חיובי על ידי השוואה בין הספקטרום וזמן השמירה לתקן אסטקסנטין אותנטי.

• כימות:

הכימות מושגת על ידי שילוב אזורי השיא של המדגם והשוואתם לעקומת כיול שנבנתה ממאה תקני התייחסות אסטקסנטין טהורים של ריכוז ידוע. זה מאפשר מדידה מדויקת של אסטקסנטין בחינם, מונוססטרים וחלים בנפרד.

שיטת HPLC - PDA לאסטרים אסטקאנטין עשויה להשתמש:

עמודה: C18, 250 x 4.6 מ"מ, 5 מיקרומטר

שלב נייד: שיפוע של ממס A (מתנול: מים, 90:10) וממס B (אתיל אצטט) או שיטות איזוקרטיות עם ממיסים טרנריים.

קצב זרימה: 1.0 מ"ל/דקה

איתור: 470 ננומטר

טמפרטורה: 25 מעלות

• הכנת מדגם:

מיצוי הוא צעד קריטי לפני - ל- HPLC. ניתן לדלל שמנים ישירות בממס מתאים. ביומסה או אבקות מיובשות דורשים תהליך מיצוי קפדני יותר, לרוב באמצעות ממסים כמו אצטון, אתיל אצטט או טטרה -הידרפורן (THF) עם חרוז {}}} מכות או סוניקציה כדי לפרק את קירות התא ולהבטיח מיצוי מוחלט.

ספקטרומטריה המונית (LC - MS/MS)

• עקרון:

צימוד HPLC לספקטרומטר המוני (LC - MS או LC - MS/MS) מוסיף שכבה שאין שני לה של ספציפיות ואישור. גלאי MS מזהה תרכובות על בסיס המסה שלהם - ל- - יחס טעינה (M/Z).

• יישום:

זיהוי אישור: מספק אישור משקל מולקולרי מוחלט . 100 אסטקסנטין טהור הוא בעל משקל מולקולרי של 596.8 גרם/מול. האסטרים שלה יראו מסות גבוהות יותר בהתאמה (למשל, מונטר עם חומצה שומנית של MW 282 תהיה מסה של 596.8 + 282 - 18=860.8, המהווה את אובדן המים במהלך האסיפה).

• גילוי זיהומי עקבות:

יעיל ביותר לזיהוי וכימות רמות נמוכות של קרוטנואידים אחרים, מוצרי השפלה או מזהמים שגלאי PDA עלול לפספס.

• מחקרי מטבוליקה:

משמש במחקר כדי לעקוב אחר אסטקסנטין ומטבוליטים שלו בדגימות ביולוגיות (דם, רקמות) כדי לחקור את ספיגתו, התפלגותו וזמינותו הביולוגית.

בדיקות למזהמים וטוהר

• ממסים שיוריים:

כרומטוגרפיה של גז (GC) עם גלאי יינון להבה (FID) או ספקטרומטר המוני (MS) משמשת לאיתור וכימות ממסים אורגניים נדיפים (למשל, הקסאן, אתנול, אתיל אצטט) שנשארו מתהליך המיצוי, מה שמבטיח שהם מתחת למגבלות הבטיחות שנקבעו על ידי PharmacopoeiA (EG, EG, EG, EG, EG, EG (EG, EG (EG, (EG, (EG, (EG, (EG, (EG,<467>).

Purity test

• מתכות כבדות:

משמשות ספקטרומטריה של מסה פלזמה משולבת באופן אינדוקטיבי (ICP - MS) או ספקטרוסקופיה של ספיגה אטומית (AAS) כדי לבדוק מתכות רעילות כמו עופרת, ארסן, קדמיום וכספית. המגבלות מחמירות, לרוב בעקבות USP<232>/ ICH הנחיות Q3D.

• בדיקות מיקרוביולוגיות:

שיטות ספירת צלחות סטנדרטיות משמשות כדי להבטיח שמוצר אסטקסנטין 100 טהור נמצא בגבולות בטוחים לספירת מיקרוביאלית אירובית מוחלטת, שמרים ועובש מוחלטים, והיעדר פתוגנים ספציפיים כמו E. coli, סלמונלה וסטפילוקוקוס אאורוס.

• חומרי הדברה:

GC - MS או LC - MS/MS משמשים למסך למאות שאריות חומרי הדברה פוטנציאליים, חשובים במיוחד לביומסה של אצות שגדלו בבריכות פתוחות.

בדיקת יציבות

היציבות מוערכת באמצעות פרוטוקולי בדיקה מואצים לכל הנחיות ICH (Q1A (R2)). דגימות מאוחסנות בתאי יציבות בתנאים לחוצים:

• טמפרטורה גבוהה: למשל, 40 מעלות ± 2 מעלות

• לחות גבוהה: למשל, 75% ± 5% RH

• חשיפה לאור: לפי ICH Q1B

100 דגימות אסטקסנטין טהורות נמשכות במרווחים מוגדרים (0, 1, 2, 3, 6 חודשים) ונבדקים בעיקר באמצעות HPLC לתוכן אסטקסנטין. קצב ההשפלה מנותח כדי לחזות את חיי המדף של המוצר בתנאי אחסון מומלצים. זה מסייע גם בגיבוש מוצרים יציבים עם נוגדי חמצון מתאימים (למשל, ויטמין E) ואריזה (אטומים, מכולות אטומות אוויר).

מַסְקָנָה

היתרונות הבריאותיים המדהימים של 100 אסטקסנטין טהור הניעו אותו לחזית ענפי המזון התזונתיים והפונקציונליים. עם זאת, ניתן לממש הבטחה זו רק אם המוצר הוא אמיתי, חזק, טהור ויציב. בדיקת אסטקסנטין, אפוא, מעברים מהליך טכני גרידא לעמוד בסיסי של שלמות המוצר ואמון הצרכנים.

בעוד שלספקטרופוטומטריה פשוטה יש את מקומו לבדיקות מהירות, HPLC - PDA הוא סוס העבודה ההכרחי לכימות וזיהוי מדויק. CHIRAL HPLC ו- LC - MS/MS מספקים את ההוכחה המוחלטת הנדרשת לאימות אסטקסנטין טבעי ולאיתור תחכום. יתר על כן, משטר בקרת איכות מקיף חייב לכלול בדיקות למזהמים כמו מתכות כבדות, ממסים ומיקרובים.

המחקר הנרחב על 100 אסטקסנטין טהור לא רק מאשר את עליונותו הביולוגית, אלא גם מספק את הבסיס המדעתי לטכניקות אנליטיות מתוחכמות אלה. בסופו של דבר, האחריות ליישום בדיקות קפדניות זו נופלת על ספקים. ספק אסטקסנטין טהור בעל מוניטין 100 אינו סוחר בלבד. זהו יצרן אסטקסנטין טבעי שמטמיע בדיקות קפדניות בכל צינור הייצור שלו. גואנג'י ביוטק הוא ספק אסטקסנטין. התהליך שלנו מטמיע בדיקות קפדניות בכל שלב: מטיפוח זני הפלובאליס הטהורים של Haematococcus pure עד - ניטור תהליכים ומיצוי סופי. כל אצווה של מוצר אסטקסנטין בתפזורת מוגמרת עוברת סוללה מלאה של ניתוחים, כולל HPLC - PDA לעוצמה, GC לממסים, ICP - MS עבור מתכות כבדות ומבחנים מיקרוביולוגיים. התחייבות זו, המתועדת בתעודת ניתוח מפורטת (COA), מבטיחה ללקוחות מוצר חזק, אותנטי, בטוח ויציב.

הפניות

[1] Capelli, B., Bagshaw, J., & Cysewski, GR (2013). סינטטי לעומת אסטקסנטין טבעי: סקירה של זמינות ביולוגית ויעילות. Cyanotech Corporation.

[2] Fassett, RG, & Coombes, JS (2011). אסטקסנטין: חומר טיפולי פוטנציאלי במחלות לב וכלי דם. תרופות ימיות, 9 (3), 447–465.

[3] Hosseini, SM, Hashemi Gahruie, H., Razmjooie, M., et al. (2020). ההשפעה של תנאי האחסון על היציבות של ננוליפוזומים אסטקסנטין. Journal of Food Science וטכנולוגיה, 57 (4), 1425–1434.

[4] ועידה בינלאומית להרמוניזציה (ICH). (2003). בדיקת יציבות של חומרים ומוצרים חדשים לתרופות (Q1A (R2)).

[5] ועידה בינלאומית להרמוניזציה (ICH). (2005). זיהומים: הנחיות לממסים שיוריים (Q3C (R6)).

[6] Nishida, Y., Yamashita, E., & Miki, W. (2007). פעילויות מרוות של נוגדי חמצון הידרופיליים וליפופיליים שכיחים כנגד חמצן יחיד באמצעות מערכת גילוי כימילומינסקנציה. מדע קרוטנואיד, 11, 16-20.

[7] Turcato, A., Gianoncelli, A., & Ribaudo, G. (2022). אסטרטגיות אנליטיות להערכת אסטקסנטין ונגזרותיו במוצרים מסחריים. מולקולות, 27 (15), 4794.

[8] ארצות הברית Pharmacopeia (USP). (2022).<467>ממסים שיוריים. אמנת פרמקופיאלי של ארצות הברית.

[9] ארצות הברית Pharmacopeia (USP). (2022).<232>זיהומים אלמנטליים - מגבלות. אמנת פרמקופיאלי של ארצות הברית.

[10] Yuan, JP, Peng, J., Yin, K., & Wang, JH (2011). בריאות פוטנציאלית - קידום השפעות של אסטקסנטין: גבוה - מעריך קרוטנואיד בעיקר ממיקרו -אצות. תזונה מולקולרית ומחקרי מזון, 55 (1), 150–165.